En la síntesis típica de ADN, ARN y ácidos nucleicos no naturales, el paso de Desprotección y Acoplamiento juega un papel crucial.
El paso de desprotección consiste en eliminar el grupo DMT en el soporte sólido o el grupo 5' hidroxilo en el nucleósido anterior con ácido orgánico y exponer el grupo hidroxilo para el siguiente paso de acoplamiento.El ácido tricloroacético al 3% en diclorometano o tolueno se utiliza principalmente para llevar a cabo la etapa de desprotección.La concentración de ácido tricloroacético y el tiempo de desprotección (tiempo de desbloqueo) dominan la pureza de los productos finales.La baja concentración y el tiempo de desbloqueo insuficiente dejan al grupo DMT sin reaccionar, lo que disminuye el rendimiento y aumenta las impurezas no deseadas.El largo tiempo de desbloqueo puede provocar la depurina de las secuencias sintetizadas, formando impurezas inesperadas.
El paso de acoplamiento es sensible al contenido de agua de los disolventes y a la humedad del aire.La concentración de agua en la síntesis debe ser inferior a 40 ppm, mejor inferior a 25 ppm.Para mantener la condición de síntesis anhidra, la síntesis de ácidos nucleicos debe realizarse en un ambiente de baja humedad, por lo que recomendamos a nuestro cliente utilizar elEquipos disueltos de amiditas, que puede disolver la fosforamidita en polvo o aceitosa en acetonitrilo anhidro para evitar el contacto con el aire.
Dado que la disolución de las fosforamiditas es mejor en situaciones sin agua y las trampas moleculares absorben las trazas de agua en los reactivos y la amidita, es necesario preparar laTrampas moleculares.Recomendamos un tamiz de 2 g para botellas de reactivo de 50 a 250 ml, 5 g para botellas de reactivo de 250 a 500 ml, 10 g para botellas de reactivo de 500 a 1000 ml y 20 g para botellas de reactivo de 1000 a 2000 ml.
La disolución de las fosforamiditas debe realizarse bajo una atmósfera inerte y la sustitución de los reactivos activadores y el acetonitrilo debe finalizar a tiempo.Los reactivos de protección y oxidación deben usarse lo antes posible; los reactivos abiertos tienen una vida útil más corta y menos actividad durante la síntesis.
Hora de publicación: 09-ago-2022