Tanto la síntesis de ADN como la de ARN se basan en la estrategia de síntesis en fase sólida y la química de fosforamiditas. Un sintetizador de ADN puede utilizarse para sintetizar ARN o análogos de ARN sin modificaciones adicionales, y los reactivos de la síntesis de ADN pueden emplearse directamente en la síntesis de ARN y ácidos nucleicos artificiales. Como se muestra en la Figura 1, el grupo 2'-hidroxilo de la fosforamidita de ARN está protegido con un grupo protector de sililo, es decir, t-butildimetilsililo (TBDMS), lo que previene reacciones secundarias en el frágil grupo 2'-hidroxilo. El voluminoso grupo TBDMS dificulta la reacción entre la fosforamidita y el grupo 5'-hidroxilo del soporte sólido, y se requiere un tiempo de acoplamiento más prolongado para lograr la eficiencia de acoplamiento deseada.
De forma similar a la síntesis de ADN, el ARN sintetizado se separó primero del soporte sólido mediante aminólisis, y posteriormente el grupo TBDMS se eliminó con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) o trihidrofluoruro de trimetilamina. El ARN crudo se purificó mediante recristalización en alcohol y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).
Figura 1. Estructura química de los componentes básicos en la síntesis de ADN y ARN.
a) fosforamidita de dABz y b) fosforamidita de rABz 2'-OTBDMS.
El desarrollo de fármacos de ARNip requiere análogos estructurales del ARN nativo para aumentar la biocompatibilidad. El grupo 2'-hidroxilo del ARN puede sustituirse por grupos MeO, F y MOE, y el ácido nucleico bloqueado (LNA) también ofrece un buen rendimiento en la terapia con ARN (Figura 2). Estos fosforamiditas presentan una actividad similar a la de los fosforamiditas de tipo ADN en la síntesis, y el proceso de purificación y procesamiento de estos ácidos nucleicos no naturales es similar al del ADN nativo.
Figura 2. Estructura química de los componentes básicos de los fármacos siRNA. a) Fosforamidita dABz 2-MeO; b) Fosforamidita dABz 2-F; c) Fosforamidita dABz 2-MOE y d) Fosforamidita dABz bloqueada.
Fosforamiditasson esenciales para la síntesis de genes, incluyendo principalmente las familias de ADN y ARN y sus derivados, todos los fosforamiditos mencionados anteriormente los podemos ofrecer en un paquete.
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Fecha de publicación: 9 de agosto de 2022