El principio básico de la síntesis de ADN.

La síntesis química de ADN se basa en la estrategia de síntesis en fase sólida y la química de la fosforamidita.A diferencia de la síntesis biológica de ADN, el material en la síntesis química de ADN es DMT (4, 4-dimetoxitritilo) y desoxirboxísido modificado con fosforamidita, como se muestra en la Figura 1. La síntesis de ADN se lleva a cabo sobre un soporte sólido (podemos ofrecer varios deColumna de síntesis de oligo), es decir, CPG (vidrio de poro controlado) y PS (poliestireno), y toda la síntesis se realiza en unsintetizador de ADN/ARN, que es nuestro equipo principal, tiene diferentes modelos, como: sintetizador de canal único HY, HY-12, HY-192, etc., la dirección de síntesis es de 3' a 5' y se introduce un nucleótido en el soporte sólido a través de uno. ciclo de síntesis.Un ciclo típico de síntesis contiene cuatro pasos: desprotección, acoplamiento, limitación y oxidación (Figura 2).La desprotección se establece para eliminar el grupo DMT en el soporte sólido o el grupo 5' hidroxilo en el nucleósido anterior, se utiliza ácido tricloroacético al 3% en diclorometano como reactivo de desprotección.Luego se dejó que el desoxirboxísido modificado con fosforamidita expusiera el grupo hidroxilo con la ayuda de un activador, es decir, 5-etiltiotetrazol o 4,5-dicianoimidazol, formando el fosfitotriéster (III), y se realizó la etapa de acoplamiento.Se lleva a cabo una etapa de protección para bloquear el grupo hidroxilo que no ha reaccionado durante la etapa de acoplamiento, para minimizar la formación de secuencias defectuosas no deseadas.Finalmente, el fosfitotriéster inestable (III) se oxida a fosfitotriéster (V) químicamente estable con yodo como oxidante en presencia de piridina.

El ADN sintetizado podría escindirse del soporte sólido mediante aminolisis, el grupo protegido 2-cianoetilo en el fosfortriéster y la amida en la nucleobase se escinden al mismo tiempo, las placas de síntesis y las columnas de síntesis en bastidores se colocan directamente en la cámara de reacción. delEquipo de desprotección.El ADN crudo se puede preparar mediante HPLC, electroforesis y OPC bajo demanda, también podemos proporcionarle elEquipo de purificaciónpara posprocesamiento.