La síntesis de ácido nucleico se lleva a cabo utilizando el método de triglicéridos de amida siálica en fase sólida, mediante el cual el extremo 3' del ADN se inmoviliza sobre un sustrato en fase sólida y se añaden nucleótidos en la dirección 3' a 5' hasta que se sintetiza el fragmento de ADN deseado. .Esto se diferencia de la síntesis de ADN por la aplicación de ADN polimerasa.
El extremo 3' de la primera base se inmoviliza en CPG durante la síntesis, el 5'-OH de la siguiente base se protege con di-p-tolil tritilo DMT, el grupo amino de la base se protege con ácido benzoico y el extremo 3' Luego, el -OH se activa con un compuesto de aminofosfato.1 base del 5 5′-OH de 1 base y 3′-OH de la siguiente base forman un triglicérido de fosfito, que luego se oxida con yodo a un triglicérido de fosfato, el protector de la segunda base 5′-OH se elimina mediante la adición de ácido dicloroacético DM pasa por la adición de la siguiente base y, después de la síntesis, el protector del 5′-OH se elimina con un ácido débil. El fragmento se desconecta de la resina sólida con hidróxido de amonio concentrado, el protector se elimina de la base. con hidróxido de amonio concentrado bajo calentamiento, se elimina el hidróxido de amonio, el fragmento se seca al vacío y el ácido nucleico se purifica mediante cromatografía líquida o PAGE.
Pasos de la síntesis de oligo
Desbloqueo
ElEl grupo protector DMT de 5 extremos se elimina añadiendo solución de TCA.
Activación
Mezclar el activador con el monómero de oligonucleótido para formar el intermedio de monómero de oligonucleótido activo.
Acoplamiento
El grupo hidroxilo del extremo 5 reacciona con el oligonucleótido intermedio activo en una reacción de condensación antigenerativa para formar un enlace triglicérido fosfito inestable.
tapado
La adición de un agente de protección realiza una reacción de protección de acetilación con un exceso de grupos hidroxilo que no participan en la reacción de condensación.
Oxidación
La adición de una solución de yodo que contiene agua reacciona con enlaces fosfito inestables mediante oxidación para formar enlaces triglicéridos de ácido fosfórico estables.
Escisión de cianoetilo
El producto de ácido nucleico después de la síntesis, con la adición de una solución de DEA para eliminar el grupo cianoetilo del enlace fosfato triglicérido.
Escindido y desprotección
Los fragmentos de ácido nucleico se escinden del vehículo en fase sólida añadiendo una solución concentrada de hidróxido de amonio y luego se calientan para eliminar los grupos protectores de los enlaces de hidrógeno de las bases.
Hora de publicación: 21-nov-2022